Fandefasana angovo resonance fluorescence (FRET)
Ny famindrana angovo azo avy amin'ny fluorescence (FRET) dia fizotry ny famindrana angovo tsy taratra izay afindran'ny mpanome angovo mientanentana mankany amin'ny fanjakana mientanentana amin'ny alàlan'ny fifandraisan'ny mpivady elektrika intermolecular.Ity dingana ity dia tsy misy fotona ary noho izany dia tsy taratra.Ity assay ity dia manana tombony amin'ny maha haingana, mora saro-pady ary tsotra.
Mety hitovy ny loko ampiasaina amin'ny FRET assay.Fa amin'ny ankamaroan'ny fampiharana, loko samihafa no tena ampiasaina.Raha fintinina, ny famindrana ny angovo resonance manjelanjelatra dia ny famindrana ny dipoles mpivady avy amin'ny mpamatsy (loko 1) mankany amin'ny mpandray (loko 2) rehefa mientanentana ny vondrona mpamatsy.Amin'ny ankapobeny, mifanipaka amin'ny salan'ny fisoronana an'ny vondrona Acceptor ny spectrum emission an'ny vondrona Donor fluorophore."Rehefa mety ny elanelana misy eo amin'ireo fluorophores roa (10 - 100 A), dia azo jerena ny famindrana ny angovo fluorophore avy amin'ny mpanome mankany amin'ny mpandray."Ny fomba famindrana angovo dia miankina amin'ny rafitra simika amin'ny mpandray:
1. Avadika ho vibration molecular, izany hoe tsy hita intsony ny hazavana mamiratra amin'ny famindrana angovo.(Ny mpandray dia mpamono hazavana)
2. Mahery vaika kokoa noho ny mpandray azy ny etona, ka miteraka fiovaovan'ny mena amin'ny spektrum fluorescence faharoa.(Receptors dia mamirapiratra emitters).
Ny vondrona mpanome (EDANS) sy ny fototarazon'ny mpandray (DABCYL) dia mifamatotra amin'ny substrate voajanahary amin'ny protease VIH, ary rehefa tsy tapaka ny substrate, dia afaka mamono ny EDANS ny DABCYL ary avy eo dia tsy ho hita amin'ny fluorine.Rehefa tapaka ny protease VIH-1, dia tsy vonoina amin'ny DABCYL intsony ny EDANS, ary azo tsapaina avy eo ny EDANS luciferases.Ny fisian'ny protease inhibitors dia azo jerena amin'ny fiovan'ny haavon'ny fluorescence an'ny EDANS.
Ny peptides FRET dia fitaovana mety hianarana ny tsy fitoviana amin'ny peptidase.Koa satria azo araha-maso tsy tapaka ny fizotry ny fihetsik'izy io, dia manome fomba mora hamantarana ny asan'ny enzyme.Ny famirapiratana novokarina taorian'ny hydrolysis ny fatoran'ny peptide nataon'ny mpanome / mpandray dia manome fandrefesana ny asan'ny enzyme amin'ny fifantohana nanomolar.Rehefa simba ny peptide FRET dia mampiseho fanjavonana tampoka ny tselatra anatiny, fa rehefa tapaka ny fifamatorana peptide mifanohitra amin'ny mpanome/acceptor dia mamoaka tselatra izy, izay azo tsikaritra tsy tapaka ary azo isaina ny asan'ny enzyme avy eo.
Fotoana fandefasana: Aug-14-2023